HPLC-Reinheit
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Die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) ist der Branchenstandard zur Messung der Peptidreinheit. Wenn für ein Peptid ein HPLC-Reinheitswert angegeben ist, sollte dieser Wert von einem kalibrierten HPLC-System stammen, typischerweise mit einer Umkehrphasen-C18-Säule und einem UV-Detektor bei 214 nm oder 220 nm. Jeder Peak im Chromatogramm steht für eine eigene molekulare Spezies; die Fläche unter dem Zielpeak, ausgedrückt als Prozentsatz der Gesamtpeakfläche, ergibt den Reinheitswert. Bei Forschungspeptiden sollten auch sehr hohe Reinheitswerte stets zusammen mit den tatsächlich durchgeführten zusätzlichen Chargenprüfungen betrachtet werden, ohne Reinheit als Nachweis der molekularen Identität zu behandeln. Die gewählte UV-Detektionswellenlänge ist relevant: 214 nm erfasst die Absorption der Peptidbindung unmittelbar und ist die universellste Einstellung für Peptide; 220 nm wird bisweilen verwendet, um Rauschen der mobilen Phase zu unterdrücken, unterschätzt jedoch die Absorption bei Peptiden ohne aromatische Reste. Die Gradienten-HPLC, bei der sich die Zusammensetzung der mobilen Phase über die Zeit ändert, trennt eng verwandte Spezies wie verkürzte Sequenzen mit einem fehlenden Rest, oxidierte Varianten oder racemisierte Reste, die unter isokratischen Bedingungen gemeinsam eluieren würden. Der vollständige Reinheitsbericht auf einem Analysezertifikat sollte Säulentyp, mobile Phase, Gradientenprogramm, Flussrate, Detektionswellenlänge, Retentionszeit des Zielpeaks sowie eine Kopie des Chromatogramms enthalten. Nur die Betrachtung all dieser Angaben zeigt, was ein angegebener Reinheitswert für die betreffende Charge bedeutet. Peptra Labs dokumentiert diese Parameter in den verfügbaren COA-Angaben für infrage kommende Chargen.
Verwandt
- Peptid
- Analysezertifikat (COA)
- Massenspektrometrie (MS)
Zuletzt aktualisiert: 4. Mai 2026